破壁灵芝孢子粉对人肝癌 SMMC - 7721 细裸鼠皮下瘤体增殖及血管生成的研究

2019-08-12 14:31:59 发表

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摘 要: 目的: 研究破壁灵芝孢子粉( GLS) 对肝癌 SMMC - 7721 细胞裸鼠皮下成瘤模型的作用及其机制。方法: 构建人肝癌裸鼠皮下成瘤模型,将裸鼠随机分为模型组、GLS 低剂量组( 0. 5 g·kg- 1) 、中剂量组( 1. 0 g·kg- 1) 、高剂量组( 2. 0 g·kg- 1) 。给药 30 天后取血检查血清 ALT、AST、Urea、Cr,取瘤体进行 HE 染色,观察病理改变; 采用 RT - PCR 技术检测各组瘤体 PCNA 及 AFP mRNA 表达; 采用 IHC - P 及 Western - Blot 技术检测各组瘤体 PCNA 及 CD34 表达。结果: 与模型组比较,GLS 组肿瘤生长较慢,瘤重较小,差异有统计学意义( P < 0. 05) ; 瘤体病理观察显示 GLS 组坏死较模型组多; GLS 高剂量组血清 ALT、AST 均低于模型组( P < 0. 05) ,Urea、Cr 与模型组比较无差异; GLS 高剂量组 PCNA、AFP及 CD34 mRNA 表达均低于模型组( P < 0. 05) ; PCNA 蛋白在模型组表达最高,阳性率为 85% ; GLS 低剂量组阳性率为65% ; GLS 中剂量组阳性率约 50% ,GLS 高剂量组阳性率约 35% ; GLS 高剂量组 CD34 蛋白表达显著低于模型组( P <0. 05) 。结论: 破壁灵芝孢子粉能够抑制裸鼠肝癌 SMMC - 7721 细胞皮下瘤体生长,其机制可能与抑制肿瘤血管生成有关。

关键词: 灵芝孢子粉; 肝细胞肝癌; 细胞增殖; 血管生成

中图分类号: R285. 5 文献标志码: A 文章编号: 1000-1719( 2018) 01-0152-04


讨论

原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,病死率高,居癌症病死率第三位。原发性肝癌是世界上第二大导致死亡的原因,且呈现高发病率表现。在全世界,亚洲和非洲有较高的肝癌发病率。目前,临床上提倡术后配合中药长期治疗,肝癌特别是晚期肝癌病人长期食用一些抗肿瘤中药,能够能使血色素、血细胞、红细胞的总数水平提高,能减轻化疗、放疗对机体的损害。因此,寻找有效的中草药,对提高肝细胞癌的治疗水平,改善其预后,提高生活质量具有极其重要的意义。灵芝孢子主要有效成分除多糖类、三萜类、肽类外,还含有丰富的多糖肽、腺嘌呤核苷、蛋白质、酶 类、硒元素等特殊成份,其中一些成分具有抗癌活性和抗炎活性。本研究模型方法正确,裸鼠皮下成瘤率为 100% 。实验结果显示,破壁灵芝孢子粉组瘤体生长较模型组慢,瘤体重量减轻,说明破壁灵芝孢子粉明显抑制裸鼠皮下肿瘤生长。肿瘤细胞增殖活跃,其增殖状态及增殖能力是评判肿瘤生物学行为的重要指标。增殖细胞核抗原( proliferating cell nuclear antigen,PCNA) 是评估肿瘤细胞增殖活性的重要标志物,在肿瘤的诊治与预后监测等方面均显示出重要的临床价值。CD34 分子是高度糖基化的 I 型跨膜糖蛋白,是血管生成的标记物,在肿瘤中表达高低直接反映肿瘤血管生成的情况,间接反映肿瘤增殖的快慢。甲胎蛋白( alpha - fetoprotein,AFP) 是目前最常用于 HCC 普查、诊断、判断疗效和预测复发的敏感指标,当成人肝细胞发生再生或癌变时,血 清AFP 含量会急剧增加。因此,通过检测 PCNA 、CD34及 AFP mRNA 及 PCNA 蛋白在各组中的相对表达水平,比较各组肝组织的增殖能力。结果提示,GLS 能够抑制 PCNA mRNA 及蛋白表达,抑制肿瘤生长,降低了肿瘤 CD34 及 AFP mRNA 及 CD34 蛋白表达。

综上,破壁灵芝孢子粉能较好的抑制肝癌细胞增殖作用,其机制可能与抑制肿瘤血管生成密切相关